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Prior Scientific显微镜电动平台在视网膜神经节细胞研究中的应用

作者:admin  时间:2022-7-29 9:01:39

英国 Prior Scientific是显微镜平台、显微镜载物台领域的龙头,他们的Prior显微镜电动平台具有行程大,准确度高的特点,在许多科研项目中有它的的身影,本篇文章主要介绍了Prior显微镜载物台在细胞科研中的应用,如视网膜神经节细胞,神经元细胞,慢性银纳米颗粒的研究应用。



Prior Scientific显微镜自动平台在神经元细胞研究中的应用

MDPI的一篇文章报道了Prior Scientific显微镜自动平台在神经元研究中的应用,文章名为Brustovetsky, T.; Khanna, R.; Brustovetsky, N. CRMP2 Is Involved in Regulation of Mitochondrial Morphology and Motility in Neurons. Cells 2021, 10, 2781.

印第安纳大学医学院(Indiana University School of Medicine)发表的这篇文章的中文标题可以翻译为:CRMP2参与调节神经元中的线粒体形态和运动。线粒体形态和运动的调节对神经元至关重要,但确切的机制尚不清楚。在这里,我们证明这些机制可能涉及崩溃反应介质蛋白2(CRMP2)。CRMP2附着在神经元线粒体上,并与动力相关蛋白1(Drp1)、Miro2和驱动蛋白1轻链(KLC1)结合。用磷酸酶PP1和PP2A抑制剂冈田酸(OA)处理神经元会导致CRMP2在Thr509/514、Ser522和Thr555处的磷酸化增加,并在Ser616处增加Drp1的磷酸化。CRMP2结合小分子(S)-拉考沙胺((S)-LCM)阻止了OA诱导的Thr509/514和Ser522处的CRMP2磷酸化增加,但在Thr555处没有,并且也未能减轻Drp1磷酸化。CRMP2磷酸化增加与CRMP2与Drp1结合减少相关,米罗2和KLC1。(S)-LCM挽救了CRMP2与Drp1和Miro2的结合,但不与KLC1结合。与CRMP2过度磷酸化同时,OA增加了线粒体裂变并抑制了线粒体交通。(S)-LCM可防止OA诱导的线粒体形态和运动性改变。用小干扰RNA(siRNA)删除CRMP2会导致线粒体裂变增加和线粒体流量减少。总体而言,我们的数据表明CRMP2表达水平和磷酸化状态参与调节线粒体形态和神经元运动。(S)-LCM可防止OA诱导的线粒体形态和运动性改变。用小干扰RNA(siRNA)删除CRMP2会导致线粒体裂变增加和线粒体流量减少。总体而言,我们的数据表明CRMP2表达水平和磷酸化状态参与调节线粒体形态和神经元运动。(S)-LCM可防止OA诱导的线粒体形态和运动性改变。用小干扰RNA(siRNA)删除CRMP2会导致线粒体裂变增加和线粒体流量减少。总体而言,我们的数据表明CRMP2表达水平和磷酸化状态参与调节线粒体形态和神经元运动。

在室温(23°C)下分析活培养的纹状体神经元中的线粒体形态。简而言之,使用旋转圆盘共聚焦显微镜收集用mito-eYFP可视化的神经元线粒体的连续图像。为此,尼康Eclipse TE2000-U倒置显微镜配备了横河旋转盘共聚焦单元CSU-10、背薄型EM-CCD相机AndoriXonEM+DU-897(Andor Technology, South Windsor, CT, USA) 和Prior显微镜电动平台Prior H-117 (Prior Scientific, Rockland, MA, USA)。该设置由Andor iQ 1.4版软件(Andor Technology,South Windsor,CT,USA)控制。为了可视化线粒体,使用风冷 Kr/Ar激光器T643-RYB-A02(Melles Griot,Carlsbad,CA,USA)在488nm处照射神经元。激光功率设置为最低水平(<5%),这足以提供高质量的图像并防止过度的光漂白。使用物镜Nikon CFI Plan Apo 100×1.4 NA,通过505nm二向色镜和535±25nm发射滤光片收集荧光。使用压电定位设备PIFOC®收集系列图像(z堆栈)P-721 (Physik Instrumente, Auburn, MA, USA),z步长0.1μm。在对神经元胞体内的整个线粒体网络进行成像时,通过在相机前面安装一个2×扩展镜头,增加了AndoriXonEM+DU-897相机(像素尺寸16×16μM)的空间分辨率。使用AutoDeblurGoldCF,版本1.4.1软件(MediaCybernetics,SilverSpring,MD,USA)执行z堆栈的3-D盲反卷积和3-D渲染。为了重建神经元线粒体的3-D结构,我们使用Imaris5.7.0版软件(Bitplane Inc.,Saint Paul,MN,USA)创建了线粒体网络的 3-D最大投影,如我们之前所述[44].为了校准图像处理和线粒体测量,使用了荧光微珠[44]。用位于神经元过程中的单个线粒体测量线粒体的长度。对于每个实验条件,分析了来自三个不同电镀层的至少10个神经元中的100个随机选择的线粒体。在荧光测量期间,神经元在含有139mM NaCl、3 mM KCl、0.8mMMgCl2、1.8mMCaCl2、10mMNaHEPES、pH7.4、5mM葡萄糖和65mM蔗糖的标准浴溶液中孵育。蔗糖用于维持与生长培养基(340mosm)中相似的渗透压。使用渗透压计OsmetteII™(Precision Systems Inc., Natick, MA, USA)测量溶液的渗透压。


Prior Scientific显微镜电动平台在视网膜神经节细胞研究中的应用

MDPI的一篇文章报道了Prior Scientific显微镜电动平台在视网膜神经节细胞研究中的应用,文章名为Lucas-Ruiz, F.; Galindo-Romero, C.; Rodríguez-Ramírez, K.T.; Vidal-Sanz, M.; Agudo-Barriuso, M. Neuronal Death in the Contralateral Un-Injured Retina after Unilateral Axotomy: Role of Microglial Cells. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 5733.

穆尔西亚生物研究所(Instituto Murciano de Investigación Biosanitaria)发表的这篇文章的中文标题可以翻译为:单侧轴切术后对侧未受伤视网膜的神经元死亡:小胶质细胞的作用。多年来,众所周知,单侧视神经损伤会引起双侧反应,从而在对侧未受伤的视网膜中引起炎症和小胶质细胞反应。这种对侧反应是否涉及视网膜神经节细胞(RGC)损失仍然未知。我们分析了在靠近视神经乳头(0.5毫米)或在小鼠眶内可以接近视神经的最远位置进行单侧轴切开术后,色素小鼠的两个视网膜中的RGC群和几个基因的表达。2毫米)。在两个视网膜中,RGC特异性基因被下调,而caspase3被上调。在对侧视网膜中,有15%RGC显着丢失,这些RGC没有进一步进展,并且在2毫米处进行轴切术时发生的更早,即,更靠近对侧视网膜。最后,用米诺环素(一种选择性抑制小胶质细胞的四环素抗生素)或美洛昔康(一种非甾体抗炎药)进行全身治疗,挽救了对侧的RGC,但没有挽救受伤的视网膜。总之,单侧视神经轴切断术会触发双侧反应,杀死未受伤视网膜中的RGC,这是由抗炎和抗小胶质细胞治疗控制的死亡。因此,对侧视网膜不应用作对照。单侧视神经轴切断术触发双侧反应,杀死未受伤视网膜中的RGC,这是由抗炎和抗小胶质细胞治疗控制的死亡。因此,对侧视网膜不应用作对照。单侧视神经轴切断术触发双侧反应,杀死未受伤视网膜中的RGC,这是由抗炎和抗小胶质细胞治疗控制的死亡。因此,对侧视网膜不应用作对照。


Brn3a的图像是用一台外差显微镜(Axioscop2 Plus;Zeiss Mikrosk opie,Jena, Germany)获得的,该显微镜配备了一个Prior显微镜电动平台(ProScanH128系列; Prior Scientific Instruments, Cambridge, United Kingdom),由图像分析软件(Image-Pro Plus, IPP 5.1 for Windows; Media Cybernetics, Silver Spring, MD)控制。视网膜光图是由154张(11×14)独立图像重建的[4]。小胶质细胞的放大率是用共聚焦显微镜(Servicio de Apoyo a la Investigación, UMU/IMIB-Arrixaca, Leica SP8; Leica Microsytems, Wetzlar, Germany)获得。

整个Brn3a+RGCs群体被自动量化,并使用以前报道的方法通过邻接图评估其分布[53]。这些地图用色标描述了在0.200毫米半径范围内一个特定细胞周围的邻居数量。所有地图都是用SigmaPlotSigmaPlot 9.0 for Windows; Systat Software, Inc., Richmond, CA, USA)绘制的。

Brn3a的表达强度是在相同设置下获得的图像中测量的,如报告所述[29],不同的是图表是用GraphPad Prism v.7绘制的。


Prior显微镜载物台在慢性银纳米颗粒研究中的应用

MDPI的一篇文章报道了Prior显微镜载物台在慢性银纳米颗粒)研究中的应用,文章名为Garcia, E.B.; Alms, C.; Hinman, A.W.; Kelly, C.; Smith, A.; Vance, M.; Loncarek, J.; Marr, L.C.; Cimini, D. Single-Cell Analysis Reveals that Chronic Silver Nanoparticle Exposure Induces Cell Division Defects in Human Epithelial Cells. Int. J. Environ. Res. Public Health 2019, 16, 2061.

弗吉尼亚理工大学( Virginia Tech)发表的这篇文章的中文标题可以翻译为:单细胞分析显示慢性银纳米颗粒暴露会导致人类上皮细胞的细胞分裂缺陷。多个组织已敦促将范式从传统的全动物化学安全测试转向替代方法。尽管这些前瞻性方法可用于风险评估和预测,但动物试验仍然是首选方法,并且在建立更强大的细胞和计算方法之前将一直如此。为了满足这一需求,我们的目标是开发一种新的、以细胞分裂为重点的方法,其理念是有缺陷的细胞分裂可能比传统测量方法更好地预测风险。为了开发这种方法,我们研究了银纳米粒子(AgNPs)对人类上皮细胞的毒性。AgNPs是消费和医疗产品中最广泛使用的纳米粒子类型,但毒性报告仍然令人困惑。细胞在短期和长期暴露时间都暴露于一系列AgNP剂量。对处理过的细胞群的分析确定了对细胞分裂的影响和异常核形态的出现,包括微核和双核细胞。总体而言,我们的结果表明,AgNPs会损害细胞分裂,不仅进一步证实了对人体细胞的毒性,而且突出了细胞群内不良表型的传播。此外,这项工作表明,基于细胞分裂的分析将成为未来毒理学研究的重要补充。不仅进一步证实了对人体细胞的毒性,而且突出了细胞群内不良表型的传播。此外,这项工作表明,基于细胞分裂的分析将成为未来毒理学研究的重要补充。不仅进一步证实了对人体细胞的毒性,而且突出了细胞群内不良表型的传播。此外,这项工作表明,基于细胞分裂的分析将成为未来毒理学研究的重要补充。

RPE-1细胞在无菌的35mm玻璃底培养皿上生长。细胞传代后24小时,未经处理的细胞在新鲜培养基中成像24小时,而处理过的细胞在24小时AgNP处理期间以及在AgNP冲洗(恢复)后24小时期间成像。成像是在L-15培养基(GibcoLifeTechnologiesCAUSA)中使用封闭的加湿台顶培养箱(Tokai Hit,型号 #INUBG2ATFP-WSKW,日本)在 37°C下补充有4.5g/L葡萄糖进行的。使用配备以下设备的NikonEclipseTi倒置显微镜(Nikon Instruments Inc.NYUSA)获取图像:(i)相衬透射,(iiLambda Smart 快门控制器(Sutter InstrumentsCAUSA),(iii) Uniblitz快门驱动器,(iv) Prior显微镜电动平台(Prior ScientificCambridgeUK),(v) 20X/03NA A-Plan 校正相差物镜(Nikon Instruments Inc., NY, USA)和 (vi) CoolSNAP-HQ2 CCD相机(Photometrics, AZ, USA)。每四分钟通过相位对比对六到十个不同的视野进行成像,持续约24小时。

使用PC计算机上的NISElementsAR软件(Nikon Instruments Inc.NYUSA)分析延时视频的有丝分裂时间和行为。有丝分裂时间被量化为细胞变圆开始和卵裂沟进入开始之间经过的时间。还对视频进行了调查,以了解任何不同的细胞行为。在所有活细胞实验中量化的行为如下:正常有丝分裂、有丝分裂停滞(细胞变圆持续时间超过3小时)和细胞死亡。对两个独立的实验进行活细胞成像,每个实验共分析了来自不同领域的200个细胞。细胞死亡和有丝分裂停滞数据报告为平均值-SEM,有丝分裂时间数据报告为来自两个独立实验的平均值±SEM





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